Mahsulotlar
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR 2019-nCoV uchun aniqlash to'plami
Kutilgan foydalanish
Ushbu to'plam yangi koronavirusni (2019-nCoV) tomoq, nazofarengeal tamponlar, bronxoalveolyar yuvish suyuqligi, balg'am yordamida sifatli aniqlash uchun ishlatiladi. Ushbu mahsulotning aniqlash natijasi faqat klinik ma'lumot uchun mo'ljallangan va uni yagona virus sifatida ishlatmaslik kerak. klinik diagnostika va davolash uchun dalillar.Bemorning klinik ko'rinishlari va boshqa laboratoriya tekshiruvlari bilan birgalikda vaziyatni har tomonlama tahlil qilish tavsiya etiladi.
Tekshirish printsipi
To'plam bir bosqichli RT-PZR texnologiyasiga asoslangan.Aslida, 2019 yilgi yangi koronavirus (2019-nCoV) ORF1ab va N genlari kuchaytirish maqsadli hududlari sifatida tanlangan.Maxsus primerlar va lyuminestsent zondlar (N gen zondlari FAM bilan belgilangan va ORF1ab zondlari HEX bilan belgilangan) namunalarda 2019 yangi turdagi koronavirus RNKsini aniqlash uchun mo‘ljallangan.To'plam shuningdek, namuna to'plash, RNK va PCR amplifikatsiyasi jarayonini kuzatish va shu bilan noto'g'ri salbiy natijalarni kamaytirish uchun endogen ichki nazoratni aniqlash tizimini (CY5 bilan belgilangan ichki nazorat gen probi) o'z ichiga oladi.
Asosiy komponentlar
| Komponentlar | Ovoz balandligi（48T/Kit） |
| RT-PCR reaksiya eritmasi | 96µl |
| nCOV primeri TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gen) | 864ml |
| Salbiy nazorat | 1500ml |
| nCOV musbat nazorat (l ORF1ab N geni) | 1500ml |
O'z reagentlari: RNK ekstraktsiyasi yoki tozalash reagentlari.Salbiy/ijobiy nazorat: Ijobiy nazorat maqsadli fragmentni o'z ichiga olgan RNK, salbiy nazorat esa nuklein kislotasiz suvdir.Foydalanish vaqtida ular ekstraktsiyada ishtirok etishlari va yuqumli deb hisoblanishi kerak.Ular tegishli qoidalarga muvofiq qayta ishlanishi va yo'q qilinishi kerak.
Ichki mos yozuvlar geni inson RnaseP genidir.
Saqlash shartlari va yaroqlilik muddati
-20 ± 5 ℃, 6 oy davomida amal qiladigan 5 martadan ortiq takroriy muzlatish va eritishdan saqlaning.
Amaldagi vosita
FAM / HEX / CY5 va boshqa ko'p kanalli lyuminestsent PCR asboblari bilan.
Namuna talablari
1. Qo'llaniladigan namuna turlari: tomoq, nazofarengeal tamponlar, bronxoalveolyar yuvish suyuqligi, balg'am.
2. Namunalar yig'ish (aseptik texnika)
Faringeal tampon: bodom bezlari va faringeal orqa devorni bir vaqtning o'zida ikkita tampon bilan artib oling, so'ngra tampon boshini namuna olish eritmasi solingan probirkaga botiring.
Balg'am: Bemorda chuqur yo'tal bo'lgandan so'ng, yo'talgan balg'amni namuna olish eritmasi solingan vintli qopqoqli probirkaga to'plang;Bronxoalveolyar yuvish suyuqligi: Tibbiyot mutaxassislari tomonidan namuna olish.3.Namunalarni saqlash va tashish
Virus izolyatsiyasi va RNK testi uchun namunalar imkon qadar tezroq sinovdan o'tkazilishi kerak.24 soat ichida aniqlanishi mumkin bo'lgan namunalar 4 ℃ da saqlanishi mumkin;24 ichida aniqlab bo'lmaydiganlar
soat -70 ℃ yoki undan past haroratda saqlanishi kerak (agar -70 ℃ saqlash sharoiti bo'lmasa, ular
-20 ℃ muzlatgichda vaqtincha saqlanadi).Tashish vaqtida namunalar qayta-qayta muzlash va eritishdan saqlanishi kerak.Namunalar yig'ilgandan keyin imkon qadar tezroq laboratoriyaga yuborilishi kerak.Agar namunalarni uzoq masofalarga tashish kerak bo'lsa, quruq muzni saqlash tavsiya etiladi.
Sinov usullari
1 Namunani qayta ishlash va RNK ekstraktsiyasi (namunani qayta ishlash maydoni)
RNK ekstraktsiyasi uchun 200 mkl suyuqlik namunasini olish tavsiya etiladi.Tegishli ekstraksiya bosqichlari uchun tijorat RNK ekstraktsiya to'plamlarining ko'rsatmalariga qarang.Ham salbiy, ham salbiy
Ushbu to'plamdagi boshqaruv elementlari qazib olishda ishtirok etgan.
2 PCR reagentini tayyorlash (reagent tayyorlash maydoni)
2.1 To'plamdan barcha komponentlarni olib tashlang va xona haroratida eritib, aralashtiring.Ishlatishdan oldin bir necha soniya davomida 8000 rpm tezlikda santrifüj qiling;zarur reagentlar miqdorini hisoblab chiqing va reaksiya tizimi quyidagi jadvalda ko'rsatilganidek tayyorlanadi:
| Komponentlar | N porsiya (25µl tizim) |
| nCOV primeri TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR reaksiya eritmasi | 2 µl × N |
| *N = sinovdan o'tgan namunalar soni + 1 (salbiy nazorat) + 1 (nCOVijobiy nazorat) | |
2.2 Komponentlarni yaxshilab aralashtirgandan so'ng, quvur devoridagi barcha suyuqlik trubaning tubiga tushishi uchun qisqa vaqt davomida santrifüj qiling, so'ngra 20 µl kuchaytiruvchi tizimni PCR trubkasiga ajrating.
3 Namuna olish (namunani tayyorlash maydoni)
Ekstraktsiyadan so'ng 5 mkl salbiy va ijobiy nazorat qo'shing.Sinov qilinadigan namunaning RNKsi PCR reaksiya trubasiga qo'shiladi.
Naychani mahkam yoping va kuchaytirgichni aniqlash maydoniga o'tkazishdan oldin uni bir necha soniya davomida 8000 rpm tezlikda santrifüj qiling.
4 PCR amplifikatsiyasi (kuchaytirilgan aniqlash maydoni)
4.1 Reaksiya trubkasini asbobning namuna xujayrasiga joylashtiring va quyidagi parametrlarni o'rnating:
| bosqich | Velosiped raqam | Harorat(°C) | Vaqt | to'plamsayt |
| Teskaritranskripsiya | 1 | 42 | 10 min | - |
| Oldindan denaturatsiyan | 1 | 95 | 1 min | - |
| Velosiped | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | ma'lumotlar yig'ish |
Asbobni aniqlash kanalini tanlash: floresan signali uchun FAM, HEX, CY5 kanalini tanlang.Yo'naltiruvchi lyuminestsent NONE uchun, iltimos, ROX ni tanlamang.
5 Natija tahlili (Sozlash uchun har bir asbobning eksperimental ko'rsatmalariga qarang)
Reaktsiyadan so'ng natijalarni saqlang.Tahlildan so'ng, rasmga ko'ra asosiy chiziqning boshlang'ich qiymatini, yakuniy qiymatini va chegara qiymatini sozlang (foydalanuvchi haqiqiy vaziyatga qarab sozlashi mumkin, boshlang'ich qiymati 3 ~ 15 ga o'rnatilishi mumkin, tugatish qiymati o'rnatilishi mumkin 5~20, sozlash) logarifmik grafikda Oynaning ostonasida chegara chizig'i logarifmik fazada, manfiy nazoratning kuchaytirish egri chizig'i esa to'g'ri chiziq yoki chegara chizig'idan pastda).
6 Sifat nazorati（Protsessual nazorat sinovga kiritilgan） Salbiy nazorat: FAM, HEX, CY5 aniqlash kanallari uchun aniq kuchaytirish egri chizig'i yo'q.
COV musbat nazorati: FAM va HEX aniqlash kanallarining aniq kuchaytirish egri chizig'i, Ct qiymati≤32, lekin CY5 kanalining kuchaytirish egri chizig'i yo'q;
Yuqoridagi talablar bir xil tajribada bir vaqtning o'zida bajarilishi kerak;aks holda, tajriba haqiqiy emas va uni takrorlash kerak.
7 Natijalarni aniqlash.
7.1 Agar sinov namunasining FAM va HEX kanallarida kuchaytirish egri chizig'i bo'lmasa yoki Ct qiymati> 40 bo'lsa va CY5 kanalida kuchaytirish egri chizig'i bo'lsa, 2019 yilgi yangi koronavirus (2019-nCoV) yo'q deb hisoblash mumkin. namunadagi RNK;
.2 Agar sinov namunasi FAM va HEX kanallarida aniq kuchaytiruvchi egri chiziqlarga ega boʻlsa va Ct qiymati ≤40 boʻlsa, namuna 2019-yilgi yangi koronavirus (2019-nCoV) uchun ijobiy deb baholanishi mumkin.
7.3 Agar sinov namunasi faqat bitta FAM yoki HEX kanalida aniq kuchaytirish egri chizig'iga ega bo'lsa va Ct qiymati ≤40 bo'lsa va boshqa kanalda kuchaytirish egri chizig'i bo'lmasa, natijalarni qayta tekshirish kerak.Qayta sinov natijalari mos kelsa, namuna yangi uchun ijobiy deb baholanishi mumkin
koronavirus 2019 (2019-nCoV).Agar takroriy test natijasi salbiy bo'lsa, namuna 2019 yilgi yangi koronavirus (2019-nCoV) uchun salbiy deb baholanishi mumkin.
Ijobiy hukm qiymati
ROC egri usuli to'plamning mos yozuvlar CT qiymatini aniqlash uchun ishlatiladi va ichki nazorat mos yozuvlar qiymati 40 ga teng.
Sinov natijalarini talqin qilish
1.Har bir eksperiment salbiy va ijobiy nazorat uchun sinovdan o'tkazilishi kerak.Sinov natijalari faqat nazoratlar sifat nazorati talablariga javob berganda aniqlanishi mumkin
2.FAM va HEX aniqlash kanallari ijobiy bo'lsa, CY5 kanalidan (ichki nazorat kanali) natija tizim raqobati tufayli salbiy bo'lishi mumkin.
3.Ichki nazorat natijasi manfiy bo'lsa, t probirkaning FAM va HEX aniqlash kanallari ham manfiy bo'lsa, bu tizim o'chirilgan yoki operatsiya noto'g'ri ekanligini bildiradi, t test yaroqsiz.Shuning uchun namunalar qayta sinovdan o'tkazilishi kerak.
